无菌技术操作的基本要求有哪些?
无菌技术指在执行医疗护理操作过程中，防止一切微生物进入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作和管理方法。
原则：
1）环境要清洁。进行无菌技术操作前30min，停止清扫工作，减少走动，防止尘埃飞扬。
）工作人员操作前，修剪指甲，洗手，戴口罩、帽子。
3）无菌物品和非无菌物品分别放置。无菌物品必须存放在无菌容器内。一经取出就认为是相对无菌，虽未使用，也不可放回无菌容器。
4）无菌包外应注明物品名称、灭菌日期。无菌包应放在清洁、干燥、固定的地方，保存期为7—14d。过期或包布受潮，均应重行灭菌处理。
5）取无菌物品须用无菌持物钳。未经消毒的用物、手、臂不可触及无菌物品，不可跨过无菌区。操作时，身体应与无菌区域保持一定的距离，手、臂须保持在腰部水平以上。
6）无菌区的边缘向内3㎝为相对无菌区：3㎝以内是无菌的安全范围。
7）一切无菌操作，均应使用无菌物品，禁用未经灭菌或疑有污染的物品。
8）一份无菌操作，仅供一位患者使用一次。
无菌技术的操作要点？
：①杀死规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的一切微生物，使作业系统变成无菌；②在作业系统与外界的联系之间隔绝一切微生物穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口,用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）;③在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统 用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。如外科手术需防止细菌进入伤口.
在各种生物实验中,为了防止微生物的生长和繁殖影响实验的进行,也要在无菌的环境下进行.
无菌操作的要求是:
1操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭
2操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入
无菌操作原则
一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。�
二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。�
三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。�
四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。
五、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。�
六、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌包或容器是否过期，其中用物是否适量。�
七、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免取用时碰在容器外面被污染。
无菌技术包括哪些？
无菌技术是预防医院感染的一项重要而基础的技术，无菌技术的目的是保持无菌物品不被污染，防止病原微生物传播。医护人员必须时刻保持无菌概念，正确熟练掌握无菌技术，这一集包括洗手技术和无菌技术基本操作方法两部分。
洗手的目的是清除手上的微生物，切断感染途径，在操作前后洗净双手，既可以有效的防止病人之间发生交叉感染，又可以保护医护人员的自身安全。正确的洗手步骤和方法分六步进行，再用流动自来水冲淋双手后，取无菌皂液洗手。
1. 掌心擦掌心；
2. 右手掌心与左手背互擦，左手掌心与右手背互擦；
3. 掌心擦掌心，十指交叉；
4. 双手指并扣，互擦指背；
5. 左拇指在右手掌心中旋转，右拇指在左手掌心中旋转；
6. 右手指摩擦左手掌心，左手指摩擦右手掌心；
进行有效的清洁洗手范围为：双手、手腕和腕上10厘米，按以上六步共搓洗10～15秒钟，再用流水冲净，取小毛巾擦干双手。
一、无菌技术基本操作法
无菌持物钳是用来夹取和传递无菌物品的器械，无菌持物钳只能夹取无菌物品，不可作其它使用。
常用的持物钳有三叉钳、卵圆钳和镊子三种。将无菌持物钳浸泡在垫有无菌纱布的不锈钢罐或玻璃容器的消毒液内，消毒液的液面应浸过关节轴以上2～3厘米，取放无菌持物钳时钳端应闭合，不能触及液面以上的容器壁和罐口边缘，使用后应立即放回容器内。
浸泡无菌持物钳时应将钳端打开，以便充分接触消毒液，使用时保持钳端向下，以免消毒液倒流至钳柄后再流下污染无菌部分，如果需要到距离较远处取物，应将持物钳和容器一起移至操作处，就地使用，用完以后再放回原处。
临床常用的无菌容器有：无菌盒、无菌罐、无菌注槽等，用于存放无菌物品，如棉球、纱布，既可以保持无菌，又便于随时取用。
从无菌容器内夹取无菌物品时，必须用无菌持物钳，持物钳和物品不能触及容器边缘，物品取出后应立即盖好无菌容器。打开无菌容器时，应将盖内面向上；关闭无菌容器时，盖子应从后向前覆盖整个容器口。手持无菌容器时，托住容器底部，手指不能触及容器内面及边缘。
使用无菌包的目的是使无菌包内的物品保持无菌状态。治疗巾使用前应消毒灭菌，消毒前应将治疗巾叠成便于使用的形式打包，方法是将治疗巾放在双层纯棉包布中央，将包布一角盖住物品，再把左右两角先后盖上，并将角尖向外翻折，盖上最后一角 ，用系带将治疗巾包十字型扎紧。
在标签上写好物品名称及灭菌日期，再将标签和化学指示胶带一起贴在包上，经高压蒸汽灭菌后即为无菌包。开包前，应检查无菌包名称、灭菌日期及化学指示胶带颜色改变情况。把无菌包放在清洁、干燥的操作台上，解开系带，妥善的放在包布下，再捏住包布角的外面依次揭开包布外角、左右两角和内角，注意不能触及包布内面。用无菌钳夹取所需物品放在准备的无菌区内，包内物品如一次没用完应按原折痕依次包盖并将系带横向缠绕固定，注明开包日期和时间 ，24小时内可再使用。
如果要一次将包内物品全部取出，可将包托在手上，另一只手将包布四角抓住，稳妥的将包内物品放在无菌区内。
按照无菌技术操作的方法取用无菌溶液。取用无菌溶液时应该首先核对药名和有效期，检查瓶口是否松动，再次检查药液有无变质、沉淀，如果药液已经变质就不能使用。
取开铝盖，将瓶塞边缘向上翻起，拿出瓶塞，手不能触及瓶口和瓶塞内面，将贴标签的一面握在手中，先冲洗瓶口，再由原处将溶液倒入无菌容器内，按无菌技术操作方法盖好无菌盘。
用2%碘酊消毒瓶口及瓶塞内面，再用70%乙醇脱碘，然后盖回瓶塞，注明开瓶日期和时间，已打开的溶液可以保存24小时。
无菌盘是将无菌巾铺在治疗盘上形成无菌区域。检查无菌包名称和灭菌日期，解开系带，打开无菌包，用无菌持物钳从无菌包内夹取一条无菌治疗巾放在治疗盘中，夹取治疗巾时，注意不能跨越无菌区。取出无菌治疗巾后按原折痕包好治疗巾，将系带横向缠绕并注明开包日期和时间，24小时内可再使用。
双手捏住治疗巾两角的外面，扇形展开，边缘向外。用无菌包开包法打开无菌治疗碗包，方法是先松开包的系带，将系带稳妥的握在手中，小心的拿住包布四角，将治疗碗放在无菌区内，无菌治疗巾应铺在清洁、干燥的治疗盘内，用无菌持物钳取出治疗碗内的镊子，再把治疗碗妥善摆放，打开无菌罐盖按所需用量夹取棉球和纱布，夹取物品时持物钳只能在操作台上以上移动。如果需要夹取油纱布，应该使用专用无菌持物钳。无菌巾内物品放置应有序，以保证使用方便。操作时应防止无菌巾内面被污染。取用溶液时先倒消毒液，再倒无菌溶液。取用无菌溶液时要先核对标签，检查瓶盖是否松动，溶液有无沉淀、变质。如果发生以上情况必须更换溶液。
取开铝盖，打开瓶塞，冲洗瓶口，再将无菌溶液倒入无菌容器内，将治疗巾上下层边缘对齐，按无菌操作方法盖好。
取放无菌物品时，操作者要面向无菌区，手臂必须保持在腰部水平以上或者桌面以上，因为在视线以外的无菌物污染时也不易被察觉。如果器械或物品已经被污染或怀疑有污染时，不能再继续使用，应该重新更换无菌物品，注明开瓶日期和时间以备使用。
铺好无菌盘以后，把操作时需要的物品准备好，一起带到使用处。
二、带无菌手套法 带无菌手套前应该核对手套包上的手套号码及灭菌时间。按无菌包开包法打开无菌手套包包布，翻开手套袋，用滑石粉涂抹双手，左手掀开手套袋开口处，右手捏住手套的反折部分，取出手套，对准五指戴上，再用戴好手套的手指插入另一只手套的反折内，取出手套，用同样的方法戴好，脱手套前应该冲净手套上的脓血，再至手套口往下翻转，脱下。第二种方法是将手套袋反折，捏住手套反折处，同时取出两只手套，将手套的掌心相对，再分别戴好。
脱手套时注意不要强行拉扯手指部分。
无菌技术的操作原则：
无菌操作环境应清洁、宽敞，避免人群走动，尘埃飞扬；
操作者要穿戴整洁，戴好帽子、口罩，修剪指甲，刷洗双手；
无菌物品必须与非无菌物品分开放置；
无菌物品有明确标志；
进行无菌技术操作时应首先明确无菌区和非无菌区；
操作者应面向无菌区域，身体应与无菌区保持一定距离；
无菌物品一经取用即使未使用也不可放回无菌容器内；
进行无菌操作时，手臂不可跨越无菌区，手不可接触无菌物；
操作时手臂应保持在腰部或操作台面以上
什么是无菌技术
无菌检查是检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否染有活菌的一种方法。其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，若其中的任何一个环节属非无菌操作，那么其它环节虽是无菌操作，也将完全失去意义。本文提出无菌操作技术中应该加强注意的事项
无菌技术名词解释书本上的
无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。
生物制品的无菌检查法的实验原理，准备工作及操作步骤？
1. 目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。 2. 范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。3. 责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。4. 定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。5.内容：5. 1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小 时。5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。 无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、 三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。5.2.2用具的包扎：5.2.2.1移液管在移液管上端管内,松松地塞进少许原棉,然后放入不锈钢灭菌筒内。5.2.2.2试管在管口塞上纱布棉塞。5.2.2.3无菌衣、裤、帽、口罩将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入布袋，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。5.2.2.4注射器洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内（饭 第3页/共7页盒）一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。5.2.2.5滤器 将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡湿润，取出后固定在细菌过滤器的滤板上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。在灭菌前滤器的螺勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入容器内，再将盛滤器的容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。5.2.3用具的灭菌：将包扎好的用具，在121±0.5℃蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易致染菌，应置温箱或或加温烘干。5.3培养基、试剂：5.3.1一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经30-35℃培养48小时，真菌培养基须经20-25℃培养72小时，证明无菌生长后方可使用。 制备的需气菌、厌气菌培养基应半个月内用完，在供试品接种前，培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则须经水浴煮沸加热，只限加热一次。5.3.2革兰氏碘液：先用3-5ml蒸馏水溶解2.0g碘化钾，再加入1.0g碘片，搅拌溶解后，加蒸馏水稀释至300ml，摇匀。置密闭棕色瓶中备用。5.3.3结晶紫染色液：将结紫1.0g溶解于20ml95%乙醇中后，与80ml1%草酸铵溶液相混合，静置48小时使用。此液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。5.3.4沙黄染色液：将0.2g沙黄溶解于10ml95%乙醇中，待完全溶解后再加蒸馏水至100ml。5.3.5生理盐水：称取9g氯化钠，加水1000ml溶解，分装后于121±0.5℃湿热灭菌30分钟。供作稀释剂用。 第4页/共7页5.3.6 75%乙醇量取无水乙醇75ml,加水稀释至100ml，摇匀，即得。5.3.7 0.1%新洁尔灭：量取5%新洁尔灭20ml，加水稀释至约1000ml，摇匀，即得。5.4培养基灵敏度检查：5.4.1新购的干燥培养基或采用不同牌号原材料的新鲜培养基，其质量均应符合灵敏度检查要求。 (1)取藤黄微球菌[Micrococcus luteus CMCC（B） 28001］的营养琼脂斜面和白色念珠菌[Candida albicans CMCC（F）98001］的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；取生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC（B）64941]不含琼脂的需气、厌气培养基新鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，沉淀菌体用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌悬液。然后以10倍系列稀释后，制成1ml中含10-100个菌并计数。 (2)取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气、厌气培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，取接种至霉菌培养基内，20-25℃用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。 将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为12ml的需气、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。结果判定：以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。5.4.2配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超过2周，临用前细菌和霉菌培养基分别经30-35℃和20-25℃培养不少于48小时和72小时，证明无菌生长后方可使用。5.4.3需气菌、厌气菌培养基在试管中装量高度不得少于7Cm，其指示剂氧化层不得超过培养基深度的1／5，否则须经水浴煮沸10分钟，但只限加热一次。 第5页/共7页无菌试验培养时间结束时，指示剂氧化层应不超过培养基深度的1／2。5.5对照用菌液的制备：5.5.1试验用菌种、菌种的复苏、菌种的接种与保存等均应按照“抗生素微生物检定法”标准操作规程项下操作。5.5.2金黄色葡萄球菌菌液用接种环取金黄色葡萄球菌[Staphy-lococcus aureus CMCC（B）26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至营养肉汤培养基内，在30-35℃培养16-18小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:1065.5.3生孢梭菌菌液用接种环取生孢梭菌[CMCC（B）64941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30-35℃培养18-24小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:106。5.5.4白色念珠菌菌液用接种环取白色念珠菌[CMCC（F）98001]的真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20-25℃培养24小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:105。5.5.5上述制备的菌液，一般当日使用。5.6进入无菌室的操作要点：5.6.1根据试验程序,将用具物品搬入缓冲间,打开紫外光灯和空气过滤装置并使其工作1小时以上。5.6.2操作人员用肥皂水刷洗双手,关闭缓冲间紫外光灯,进入缓冲间内,关闭第一层门,用2%来苏尔或0.1%新洁尔灭溶液洗双手,用消毒毛巾擦干,换上无菌衣、帽、口罩及消毒鞋。5.6.3关闭无菌室内紫外光灯，进入第二层门并将用具搬至无菌室内，关闭无菌室门。5.6.4凡进入无菌室后不应再外出取物品，因此，在每次试验中所用物品必须计划好，并准备好备用物品。从进入第一层门直至无菌室内，随操作人员的进入应喷雾2%来苏尔或0.1 %新洁尔灭溶液。5.7检查法：5.7.1无菌检查法包括：直接接种法和薄膜过滤法。前者适用于非抗菌作用的供试品；后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。5.7.2操作时，应先用0.1%新洁尔灭浸泡或擦拭容器表面后，以无菌的方法取 第6页/共7页内容物。5.7.3凡无菌检查中，均应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。5.7.4供试品制备： 用灭菌镊取出注射器，在火焰旁将针芯插入针管并安上针头，盖为橡皮塞时，用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取药液。按规定须稀释或灭活的供试品，可直接或将瓶内供试液抽出至灭菌玻璃容器内进行灭活处理并稀释至规定的体积和浓度；抽取瓶中内容液体时，应将供试品倒置并使针头在液面下。5.7.5直接接种法：按规定量取供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需气菌、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌液1ml，作阳性对照，另接种于真菌培养基5管。轻轻摇动，使供试品与培养基混合。需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃、真菌培养基管置20-25℃培养7日。在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。5.7.6薄膜过滤法： 将微孔滤膜过滤装置、抽滤瓶、排气管与真空泵相连，真空泵可置无菌室外。取规定量供试品，按规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，混合后，通过装有孔径不大于0.45μm 的薄膜过滤器，减压抽干后，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次至少100ml，取出滤膜分成3等份，分别加入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。阳性对照管应根据供试品特性加入相应对照菌液1ml（抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌）。阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。5.8结果判断： 第7页/共7页当阳性对照管显浑浊并确有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽浑浊但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。6 培训6.1 培训对象：化验员。6.2 培训时间：二小时。7 记录 记录名称 保存部门 保存时间 无菌检验记录 质监科 药品有效期后一年 QF-01-007-00无 菌 检 验 记 录品 名： 批 号： 规 格： 检验日期： 年 月 日培养基名称需气、厌气菌培养基真菌培养基培养培养温度30—35℃20—25℃培养时间管 号1234512345培养天数及结果1234567结 论备 注 复核人： 检验人：
什么是无菌操作
所谓的无菌操作，是指接种操作的空间、使用的器皿和工具、操作的衣着和手，不能沾染任何活的微生物，以保证接种材料不沾染杂菌的整个接种操作过程，也是菌种分离、转扩中的重要技术环节之一。其具体操作如下：
（1）接种前必须使待接种物冷却到适宜温度（28～30℃）防止高温接种热死菌种。同时要对接种箱（室）进行清洁消毒，并准备好接种工具。
（2）将已灭菌冷却过的待接种物（试管、瓶、袋）及各种需有物品提前搬入接种箱（室）内，用药物熏蒸，有条件的可用紫外线灯灭菌20～30分钟或用环境消毒器灭菌30分钟，效果会更好。
（3）接种人员在操作前穿上无菌工作服、工作鞋，带好口罩和工作帽，若没有的也可以换一套清洁的衣服。再用新洁而灭溶液表面消毒，同时用消毒液洗手，然后带菌种或分离物进入接种室（箱）。
（4）接种操作前，用70%酒精棉球擦手、菌种容器表面、工作台面及接种工具，再点燃酒精灯开始接种操作。操作时，要思想集中，严格认真，动作要轻，尽量减少空气流动。
（5）接种结束，及时搬出所有物品，收拾干净。若要连续使用，必须重新进行全面的消毒灭菌。
何谓无菌操作？？
无菌操作：指防止外界杂菌污染，保证纯培养的技术操作，若操作不慎，污染杂菌，将导致实验失败或损坏菌种。